Il Gran Premio Industria e Commercio di Prato 2000, cinquantacinquesima edizione della corsa, si svolse il 19 settembre 2000 su un percorso di 194,9 km, con partenza e arrivo a Prato. Fu vinto dall'italiano Sergio Barbero della Lampre-Daikin davanti ai suoi connazionali Gabriele Missaglia e Davide Rebellin.